關(guān)于
志賀氏血清,生物學(xué)上對它的定義:是一種成分復(fù)雜的混合物,且對細(xì)胞生長具有促進(jìn)作用,我們培養(yǎng)細(xì)胞離不開血清。那么,你知道在大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)中由志賀氏血清引起的細(xì)胞生長狀態(tài)不佳及病毒滴度的影響都有哪些表現(xiàn)呢?
一、細(xì)胞生長速度緩慢,長滿單層時間長;從同一細(xì)胞瓶中分出兩瓶細(xì)胞,用同一種培養(yǎng)液,分別加入10%的對照血清和待檢血清,在相同條件下培養(yǎng)72小時,會出現(xiàn)對照血清長滿單層,而待檢血清大約只有60~70%,這種血清就不適合用來大規(guī)模培養(yǎng)細(xì)胞。
二、細(xì)胞傳代后形態(tài)不正常,細(xì)胞狀態(tài)發(fā)生變化;由于血清的質(zhì)量問題,使原本狀態(tài)正常的細(xì)胞經(jīng)傳代后形態(tài)會變差;
比如:細(xì)胞瓶里會出現(xiàn)一些蠕動的小黑點(并非污染),或者細(xì)胞表面形成一層油狀覆蓋物;細(xì)胞的輪廓變得模糊,細(xì)胞之間的間隙被血清中的蛋白顆粒填充,從而影響細(xì)胞向四周擴展生長。
三、細(xì)胞傳幾代后就出現(xiàn)脫壁現(xiàn)象,不能連續(xù)傳代;質(zhì)量較差的血清缺乏某種細(xì)胞的貼壁因子,會使細(xì)胞在傳代過程中逐漸喪失貼壁的能力。細(xì)胞會從正常的貼壁狀態(tài),邊緣開始縮小,上翹。觀察到的現(xiàn)象就是細(xì)胞表面不光滑,晃動細(xì)胞瓶會看到細(xì)胞表面有絮狀物隨培養(yǎng)液波動。隨著傳代次數(shù)增加,細(xì)胞縮小的情況越來越嚴(yán)重,直到終*脫壁而死亡。
四、細(xì)胞長的很好,致密的單層,狀態(tài)也很正常,但是接毒后細(xì)胞基本不發(fā)生病變,做滴度檢測幾乎測不出抗原滴度。這種情況也許是因為血清中含有與接種的病毒有同源的特異性抗體。
比如血清中經(jīng)常會存在乙腦抗體,牛腹瀉病毒抗體等,如果存在這些抗體,就會把接進(jìn)去的病毒給中和掉。如果抗體滴度很高,病毒會被抗體*中和,就沒病毒顆粒在細(xì)胞中增殖,所以會檢測不到病毒滴度。
這種情況給疫苗企業(yè)造成的損失是相當(dāng)大的,不產(chǎn)毒等于前面所做的那么多工作全部白費,浪費人力、物力,尤其是時間上的浪費,從培養(yǎng)細(xì)胞開始到接病毒,到收液至少需要一兩個月,一旦出現(xiàn)不產(chǎn)毒的情況,那么這一兩月時間就白白浪費掉了,這也是牛血清給疫苗企業(yè)造成的風(fēng)險之一。
五、細(xì)胞生長的狀態(tài)一般,產(chǎn)毒少,毒價低。這種情況比較常見,細(xì)胞是病毒的載體,由于血清質(zhì)量不好,導(dǎo)致細(xì)胞生長狀態(tài)不好,病毒就無法進(jìn)行正常的復(fù)制。并非病毒都不能復(fù)制,所以就造成疫苗的效價不夠,可能造成不合格產(chǎn)品。