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呼吸道合胞病ELISA試劑盒

呼吸道合胞病ELISA試劑盒

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呼吸道合胞病ELISA試劑盒

  • 產(chǎn)品描述

呼吸道合胞病檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

1、實(shí)驗(yàn)原理

此酶免試劑盒可用于人血清中抗RSV(呼吸道合胞病毒)IgM抗體的體外定性和定量檢測(cè)。

產(chǎn)品咨詢專(zhuān)線:

2、前言說(shuō)明

在患有細(xì)支氣管炎或肺炎的六個(gè)月大的嬰兒中,可發(fā)現(xiàn)呼吸道RSV感染和特定的臨床癥狀之間有明顯的。在年齡稍大 的嬰兒和小兒中,感染癥狀會(huì)溫和一些。 25%以上的RSV呼吸道感染都是可被察覺(jué)的。由于RSV再次感染的可能性,人們認(rèn)為這些再次感染的抗體與成年人中這些疾病的緩慢發(fā)展過(guò)程(類(lèi)似于感冒) 有關(guān)。然而,特別是早年,血清抗體并不能成為抗呼吸道感染的有效保護(hù)。因此,這種病原體可能會(huì)引起細(xì)支氣管炎或引起四歲大的嬰兒患肺炎?;诤粑篮习?毒抗原的關(guān)系,我們可以將呼吸道合胞病毒分為兩大類(lèi)(A和B)。病毒的表面糖蛋白(G糖蛋白和融合糖蛋白)可產(chǎn)生病毒抑制抗體。RSV的A和B類(lèi)病毒的G 糖蛋白與F糖蛋白相比明顯不同。用于RSV血清學(xué)診斷的補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn),其結(jié)果不是很理想。用于RSV感染的血清學(xué)診斷的酶免檢測(cè)具有很高的診斷價(jià)值,因?yàn)?酶免檢測(cè)靈敏度很高,并且可區(qū)分不同抗原的免疫球蛋白。在RSV感染中,IgM抗體反應(yīng)可能不會(huì)出現(xiàn)或很弱,以至于不能獲得可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在一急性感染 中,因?yàn)镮gA抗體可能會(huì)持續(xù)幾個(gè)月或幾年,所以單一樣品中的IgG抗體檢測(cè)并不明顯。被推薦為急性RSV感染血清學(xué)檢測(cè)方法是檢測(cè)血清中的IgG抗體 (雙份,要求其濃度明顯提高了)。健侖生物

3、實(shí)驗(yàn)原理

此固相ELISA試劑盒利用的夾心法原理。包被板上包被了抗原。用對(duì)人IgM具有特異性的酶標(biāo)二抗來(lái)檢測(cè)結(jié)合到包被抗原的樣品特異性抗體。底物反應(yīng)后,所顯示的顏色強(qiáng)度與檢測(cè)到的IgM特異性抗體的量成正比。樣品的結(jié)果可直接使用標(biāo)準(zhǔn)曲線得。健侖生物

4、試劑盒組成:

4×2ml

標(biāo)準(zhǔn)品A-D

1;10;50;150U/mL,待用

標(biāo)準(zhǔn)品A=陰性質(zhì)控           標(biāo)準(zhǔn)品B=臨界質(zhì)控

標(biāo)準(zhǔn)品C=弱陽(yáng)性質(zhì)控         標(biāo)準(zhǔn)品D=陽(yáng)性質(zhì)控

內(nèi)含抗RSV的IgM抗體,PBS(磷酸緩沖液),穩(wěn)定劑。

1×14ml

酶標(biāo)IgM

紅色,待用。內(nèi)含過(guò)氧酶標(biāo)記的抗人IgM,蛋白緩沖液,穩(wěn)定劑。

1×12×8

包被板

可拆,包被有特異性抗原。

1×14ml

TMB底物液

含TMB

1×14ml

TMB終止液

0.5M的H2SO4

1×60ml

稀釋液

含PBS緩沖液,<0.1%NaN3

1×60ml

濃縮洗滌液

濃縮型(10×),含PBS緩沖液,吐溫20

粘性金屬板

用于在溫育時(shí)遮蓋包被板

塑料袋

用于儲(chǔ)存不用的板條

5、實(shí)驗(yàn)所需材料但試劑盒不提供

1)        RF吸附劑

2)        移液器,體積:5;50;100;500 µL

3)        校準(zhǔn)儀

4)        樣品稀釋用試管(1ml)

5)        帶試劑儲(chǔ)器8道移液器

6)        洗滌瓶,自動(dòng)或半自動(dòng)洗板機(jī)

7)        能在450nm處讀數(shù)的酶標(biāo)儀

8)        雙蒸水或去離子水

9)        吸水紙,取樣吸頭和計(jì)時(shí)器

6、實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說(shuō)明

6.1成分準(zhǔn)備

稀釋/溶解

成分

 

稀釋液

比例

備注

貯存

穩(wěn)定性

60ml

洗滌液

加600ml

雙蒸水

1:10

加熱至37°C以溶解

結(jié)晶,充分混合

2-8°C

8周

6.2樣品稀釋

樣品

稀釋

稀釋液

比例

備注

血清/血漿

全部稀釋

稀釋緩沖液

1:101

例:5µL+500µL

樣品中IgM濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn)品的應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步稀釋。健侖生物

6.3用RF吸附劑處理:

注意

為了避免特異性IgG和類(lèi)風(fēng)濕因子的干擾,病人的血清應(yīng)當(dāng)用RF吸附劑處理(RE59059)。

標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品千萬(wàn)不要用RF吸附劑處理。

1.

在400µL按1:101的比例稀釋的樣品中加入20µL RF吸附劑。充分混合。

2.

室溫(18-25℃)下溫育≥1min(﹤15min)

為了避免吸附特異性抗體,應(yīng)當(dāng)避免溫育時(shí)間﹥15min。

預(yù)處理的樣品可能會(huì)是渾濁的。

7、實(shí)驗(yàn)步驟:

1)        加100µL標(biāo)準(zhǔn)品和已稀釋樣本于相應(yīng)反應(yīng)孔中,在定性檢測(cè)中只使用標(biāo)準(zhǔn)品B。

2)        封板后室溫(18℃-25℃)溫育60分鐘。

3)        移去粘性金屬板,棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次,在吸水紙上拍干。

4)        在每一微孔中加入100µL酶聯(lián)物。

5)        封板后室溫(18℃-25℃)溫育30分鐘。

6)        移去粘性金屬板,棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次,在吸水紙上拍干。加底物液和終止液時(shí),如果有條件的話,可使用8孔微量移液器。確保底物液和終止液都是相同的時(shí)間間隔加入。使用確切容積并避免氣泡產(chǎn)生。

7)        每孔加TMB底物液100µL。

8)        室溫(18℃-25℃)避光溫育20分鐘。

9)        在每一微孔中加入100µLTMB終止液以終止底物反應(yīng)。輕輕搖動(dòng)包被板以使試劑混合均勻。此時(shí),顏色藍(lán)色變成黃色。

10)     加終止液后60分鐘內(nèi)在450nm處測(cè)OD值。

8、結(jié)果計(jì)算

在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上或用自動(dòng)生成的方法,以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸,濃度為X軸,繪制一標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。用立體圖、4參數(shù)對(duì) 數(shù)圖或?qū)?shù)-對(duì)數(shù)圖都可獲得良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)曲線圖,用標(biāo)準(zhǔn)品的每一單值進(jìn)行計(jì)算(樣品結(jié)果明顯異常的值必須刪除掉,應(yīng)使用更加合理的單值)。樣 品的濃度可直接從標(biāo)準(zhǔn)曲線上獲得。一旦樣品稀釋了,就應(yīng)當(dāng)乘以相應(yīng)的稀釋因子。如果樣品所測(cè)得的濃度高于zui高標(biāo)準(zhǔn),則應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備說(shuō)明所述對(duì)樣品進(jìn) 行稀釋?zhuān)⒅匦聶z測(cè)。

9、結(jié)果判定: >12 U/ml  為陽(yáng)性,8 - 12 U/ml  為可疑,< 8 U/ml  為陰性

此檢測(cè)結(jié)果并不是任何治療結(jié)果判定的*因素,它應(yīng)當(dāng)結(jié)合臨床觀察和診斷結(jié)果加以判斷。

本譯文由廣州健侖生物科技有限公司技術(shù)人員編譯,僅供參考,請(qǐng)以英文原版說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)或與我們公司工作人員!

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