- 產(chǎn)品描述
呼吸道合胞病檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
1、實驗原理
此酶免試劑盒可用于人血清中抗RSV(呼吸道合胞病毒)IgM抗體的體外定性和定量檢測。
產(chǎn)品咨詢專線:
2、前言說明
在患有細支氣管炎或肺炎的六個月大的嬰兒中,可發(fā)現(xiàn)呼吸道RSV感染和特定的臨床癥狀之間有明顯的。在年齡稍大 的嬰兒和小兒中,感染癥狀會溫和一些。 25%以上的RSV呼吸道感染都是可被察覺的。由于RSV再次感染的可能性,人們認為這些再次感染的抗體與成年人中這些疾病的緩慢發(fā)展過程(類似于感冒) 有關(guān)。然而,特別是早年,血清抗體并不能成為抗呼吸道感染的有效保護。因此,這種病原體可能會引起細支氣管炎或引起四歲大的嬰兒患肺炎?;诤粑篮习?毒抗原的關(guān)系,我們可以將呼吸道合胞病毒分為兩大類(A和B)。病毒的表面糖蛋白(G糖蛋白和融合糖蛋白)可產(chǎn)生病毒抑制抗體。RSV的A和B類病毒的G 糖蛋白與F糖蛋白相比明顯不同。用于RSV血清學(xué)診斷的補體結(jié)合實驗,其結(jié)果不是很理想。用于RSV感染的血清學(xué)診斷的酶免檢測具有很高的診斷價值,因為 酶免檢測靈敏度很高,并且可區(qū)分不同抗原的免疫球蛋白。在RSV感染中,IgM抗體反應(yīng)可能不會出現(xiàn)或很弱,以至于不能獲得可靠的實驗結(jié)果。在一急性感染 中,因為IgA抗體可能會持續(xù)幾個月或幾年,所以單一樣品中的IgG抗體檢測并不明顯。被推薦為急性RSV感染血清學(xué)檢測方法是檢測血清中的IgG抗體 (雙份,要求其濃度明顯提高了)。健侖生物
3、實驗原理
此固相ELISA試劑盒利用的夾心法原理。包被板上包被了抗原。用對人IgM具有特異性的酶標二抗來檢測結(jié)合到包被抗原的樣品特異性抗體。底物反應(yīng)后,所顯示的顏色強度與檢測到的IgM特異性抗體的量成正比。樣品的結(jié)果可直接使用標準曲線得。健侖生物
4、試劑盒組成:
4×2ml | 標準品A-D | 1;10;50;150U/mL,待用 標準品A=陰性質(zhì)控 標準品B=臨界質(zhì)控 標準品C=弱陽性質(zhì)控 標準品D=陽性質(zhì)控 內(nèi)含抗RSV的IgM抗體,PBS(磷酸緩沖液),穩(wěn)定劑。 |
1×14ml | 酶標IgM | 紅色,待用。內(nèi)含過氧酶標記的抗人IgM,蛋白緩沖液,穩(wěn)定劑。 |
1×12×8 | 包被板 | 可拆,包被有特異性抗原。 |
1×14ml | TMB底物液 | 含TMB |
1×14ml | TMB終止液 | 0.5M的H2SO4 |
1×60ml | 稀釋液 | 含PBS緩沖液,<0.1%NaN3 |
1×60ml | 濃縮洗滌液 | 濃縮型(10×),含PBS緩沖液,吐溫20 |
2× | 粘性金屬板 | 用于在溫育時遮蓋包被板 |
1× | 塑料袋 | 用于儲存不用的板條 |
5、實驗所需材料但試劑盒不提供
1) RF吸附劑
2) 移液器,體積:5;50;100;500 µL
3) 校準儀
4) 樣品稀釋用試管(1ml)
5) 帶試劑儲器8道移液器
6) 洗滌瓶,自動或半自動洗板機
7) 能在450nm處讀數(shù)的酶標儀
8) 雙蒸水或去離子水
9) 吸水紙,取樣吸頭和計時器
6、實驗前的準備說明
6.1成分準備
稀釋/溶解 | 成分 |
| 稀釋液 | 比例 | 備注 | 貯存 | 穩(wěn)定性 |
60ml | 洗滌液 | 加600ml | 雙蒸水 | 1:10 | 加熱至37°C以溶解 結(jié)晶,充分混合 | 2-8°C | 8周 |
6.2樣品稀釋
樣品 | 稀釋 | 稀釋液 | 比例 | 備注 |
血清/血漿 | 全部稀釋 | 稀釋緩沖液 | 1:101 | 例:5µL+500µL |
樣品中IgM濃度高于zui高標準品的應(yīng)當進一步稀釋。健侖生物
6.3用RF吸附劑處理:
注意 | 為了避免特異性IgG和類風(fēng)濕因子的干擾,病人的血清應(yīng)當用RF吸附劑處理(RE59059)。 標準品和質(zhì)控品千萬不要用RF吸附劑處理。 |
1. | 在400µL按1:101的比例稀釋的樣品中加入20µL RF吸附劑。充分混合。 |
2. | 室溫(18-25℃)下溫育≥1min(﹤15min) |
為了避免吸附特異性抗體,應(yīng)當避免溫育時間﹥15min。
預(yù)處理的樣品可能會是渾濁的。
7、實驗步驟:
1) 加100µL標準品和已稀釋樣本于相應(yīng)反應(yīng)孔中,在定性檢測中只使用標準品B。
2) 封板后室溫(18℃-25℃)溫育60分鐘。
3) 移去粘性金屬板,棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次,在吸水紙上拍干。
4) 在每一微孔中加入100µL酶聯(lián)物。
5) 封板后室溫(18℃-25℃)溫育30分鐘。
6) 移去粘性金屬板,棄去孔中液體。用300µL洗滌液洗板3次,在吸水紙上拍干。加底物液和終止液時,如果有條件的話,可使用8孔微量移液器。確保底物液和終止液都是相同的時間間隔加入。使用確切容積并避免氣泡產(chǎn)生。
7) 每孔加TMB底物液100µL。
8) 室溫(18℃-25℃)避光溫育20分鐘。
9) 在每一微孔中加入100µLTMB終止液以終止底物反應(yīng)。輕輕搖動包被板以使試劑混合均勻。此時,顏色藍色變成黃色。
10) 加終止液后60分鐘內(nèi)在450nm處測OD值。
8、結(jié)果計算
在半對數(shù)坐標紙上或用自動生成的方法,以標準品的OD值為Y軸,濃度為X軸,繪制一標準曲線圖。用立體圖、4參數(shù)對 數(shù)圖或?qū)?shù)-對數(shù)圖都可獲得良好的實驗結(jié)果。對于標準曲線圖,用標準品的每一單值進行計算(樣品結(jié)果明顯異常的值必須刪除掉,應(yīng)使用更加合理的單值)。樣 品的濃度可直接從標準曲線上獲得。一旦樣品稀釋了,就應(yīng)當乘以相應(yīng)的稀釋因子。如果樣品所測得的濃度高于zui高標準,則應(yīng)根據(jù)實驗前的準備說明所述對樣品進 行稀釋,并重新檢測。
9、結(jié)果判定: >12 U/ml 為陽性,8 - 12 U/ml 為可疑,< 8 U/ml 為陰性
此檢測結(jié)果并不是任何治療結(jié)果判定的*因素,它應(yīng)當結(jié)合臨床觀察和診斷結(jié)果加以判斷。
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