抗多群腦膜炎奈瑟菌診斷血清

廣州健侖生物科技有限公司

【儲藏條件】

2~8℃避光保存，在標(biāo)明的有效期內(nèi)使用。

【有效期】

24個月

【產(chǎn)品名稱】

通用名：腦膜炎奈瑟菌診斷血清英文名：antisera for N.meningitidis

【產(chǎn)品說明】

本套血清用于A、B、C、W、X、Y等6個常見血清QUN（serogroup）腦膜炎奈瑟菌的血清群鑒定，將相應(yīng)血清群腦膜炎奈瑟菌制備滅活抗原，免疫家兔所得，血清產(chǎn)品經(jīng)免疫吸附去除了非特異性凝集成分，具有效價高，特異性強(qiáng)的特點(diǎn)。

抗多群腦膜炎奈瑟菌診斷血清

【規(guī)格】

每種血清群1瓶，每瓶2ml，均為使用液。

【使用方法】

1.產(chǎn)品在使用前，由冰箱拿出，恢復(fù)溫度到室溫后使用。

2.樣品分離培養(yǎng)物，經(jīng)鏡檢和生化鑒定，確定為腦膜炎奈瑟菌后，再進(jìn)行血清分群檢測，如果未能確定為腦膜炎奈瑟菌，不宜直接進(jìn)行血清凝集檢測，以免產(chǎn)生假陽性結(jié)果。

3.待鑒定細(xì)菌在血平板或巧克力平板上，5% CO₂，培養(yǎng)48小時。

4.用酒精擦拭玻璃片。

5.用蠟筆或防水筆將玻璃片分為8個方格。

6. 在玻片每個方格的下半部分，用移液器加5%的福爾馬林溶液（基于生物安全目的）。

7. 用無菌或一次性10μl接種環(huán)挑取BAP平板上過夜培養(yǎng)的細(xì)菌菌落。

8. 在玻片上將細(xì)菌與5%的福爾馬林溶液混勻，混勻后的液體應(yīng)該不透明，在加抗血清前應(yīng)保持細(xì)菌懸液不干燥。

9. 在玻片的上方加10μl血清群特異的抗血清，同時在陰性對照側(cè)加BS或者生理鹽水。

10. 緩慢的混合細(xì)菌懸液和抗血清，使上部的抗血清和下部的細(xì)菌懸液充分混合1-2分鐘。不要做旋轉(zhuǎn)晃動，以免不同血清群的血清會相互混合污染。

11.在燈光下，黑暗背景條件下觀察結(jié)果。1-2分鐘內(nèi)呈2+及以上凝集現(xiàn)象為陽性，1-2分鐘內(nèi)呈現(xiàn)2+以下凝集現(xiàn)象為陰性。如果過了2分鐘，才發(fā)生的凝集反應(yīng)按陰性處理。

【凝集反應(yīng)的強(qiáng)度等級】

當(dāng)抗血清與細(xì)菌接觸，會引起凝集反應(yīng)，使細(xì)胞（細(xì)菌）凝集或呈簇，細(xì)胞（細(xì)菌）上清液變得清亮，細(xì)胞懸液濃度或使用的抗血清濃度不同，會產(chǎn)生不同的強(qiáng)度的凝集反應(yīng)，見圖示

4+ 所有的細(xì)胞都發(fā)生凝集，細(xì)胞懸液清亮。

3+ 75%的細(xì)胞發(fā)生凝集，細(xì)胞上清略微渾濁不清。

2+ 50%的細(xì)胞發(fā)生凝集，細(xì)胞上清略微渾濁不清。

1+ 25%的細(xì)胞發(fā)生凝集，細(xì)胞上清略微渾濁不清。

+/- 少于25%的細(xì)胞發(fā)生凝集，可見有顆粒狀的成分。

0 沒有肉眼可見的凝集，上清懸液渾濁、平滑。

【血清群確定】

1. 1-2分鐘內(nèi)，出現(xiàn)3+或4+凝集為陽性反應(yīng)（強(qiáng)陽性反應(yīng)）。對于B群腦膜炎奈瑟菌來說，如果出現(xiàn)2+及以上的凝集則可認(rèn)為陽性。

2. 陰性反應(yīng)是+/-、1+ 或 2+（弱凝集）的凝集程度。

3. 當(dāng)菌株僅與一種抗血清出現(xiàn)凝集，但和生理鹽水不凝集時才能鑒定為該種血清型。

4. 如果不能確定血清群，菌株記為不能分群腦膜炎奈瑟菌（NG）。

5. 關(guān)于不能分群腦膜炎奈瑟菌（NG）菌株。

6. 在生理鹽水中凝集，無論與任何抗血清發(fā)生強(qiáng)反應(yīng)，都應(yīng)標(biāo)記為自凝菌。

7. 在生理鹽水中不自凝，和多種血清出現(xiàn)凝集，記為NG。

8. 不和生理鹽水凝集，也不和任何一個血清凝集也記作NG。

【結(jié)果難以判斷時解決方案】

腦膜炎奈瑟菌具有可變性（有莢膜與無莢膜，小菌落與大菌落，慢生長與快生長，強(qiáng)凝集與弱凝集），有時候很難清除解釋結(jié)果，一些建議如下：

1. 挑取同一平板上的另一個細(xì)菌克隆進(jìn)行重復(fù)凝集試驗(yàn)。

2. 如果玻片上的結(jié)果不明確，將試管中配置懸液，重復(fù)該試驗(yàn)。

3. 加20µl抗血清直接涂于玻片上，直接加一環(huán)細(xì)菌進(jìn)行混均凝集。

4. 再次培養(yǎng)，第二天進(jìn)行重新試驗(yàn)。

5. 如果當(dāng)天的平板上有各種大小不一的菌落，每種菌落再次分離純培養(yǎng)，第二天每種菌落進(jìn)行試驗(yàn)。大菌落一般會有比較好的凝集反應(yīng)，小菌落次之。

6. 如果試驗(yàn)中的問題還是不能解決，應(yīng)當(dāng)和對照菌株同時進(jìn)行試驗(yàn)，確保試劑的正確性。

【血清質(zhì)量控制】

在對未知的菌落進(jìn)行血清分群之前，應(yīng)選用一套腦膜炎奈瑟菌參考菌株（A, B, C, W, X, Y）和一株可分群的腦膜炎奈瑟菌進(jìn)行質(zhì)量控制檢測。操作步驟：

1. 新購進(jìn)的每一批次抗血清要用參考菌株進(jìn)行檢測。

2. 半年后重復(fù)質(zhì)量控制檢測

3. 如果血清管暴露于超過4℃環(huán)境，或者懷疑血清被污染時，也要對血清進(jìn)行重新的質(zhì)量控制。

4. 關(guān)于血清分群和質(zhì)量控制，每一批次的抗血清需要使用所有的參考菌株進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證，記錄質(zhì)量控制驗(yàn)證結(jié)果。

【血清質(zhì)量控制檢測結(jié)果判讀】

1. 通過質(zhì)量控制檢測

與同源性的抗原反應(yīng)，1-2分鐘內(nèi)，出現(xiàn)3+或 4+程度的凝集；單一血清群的抗血清不與其他血清群的腦膜炎奈瑟菌反應(yīng)，不與NG菌株凝集反應(yīng)，鹽水不自凝。

2. 分群血清質(zhì)量控制檢測失敗

如果抗血清與一種或多種參考菌株凝集反應(yīng)，或/和NG參考菌株反應(yīng)，鹽水自凝，則血清不能使用。

【其他所需材料】

潔凈玻片、生理鹽水（0.85%的氯化鈉溶液）、5%的福爾馬林溶液、接種環(huán)或移液器。

【注意事項(xiàng)】

1. 本產(chǎn)品只能作為腦膜炎奈瑟菌血清型判定的輔助方法，zui終的判定需形態(tài)學(xué)、生化方法和血清學(xué)方法共同進(jìn)行。

 2. 本產(chǎn)品應(yīng)避免冷凍。反復(fù)凍融會使血清產(chǎn)生沉淀。

3. 本產(chǎn)品在保存過程中可能會產(chǎn)生渾濁或沉淀，這并不表示該產(chǎn)品已被污染。離心或者過膜去掉渾濁或沉淀后，可以正常使用。

4. 本產(chǎn)品含有0.1%*作為防腐劑，丟棄時需倒入下水管，并用大量的水沖洗下水管。

廣州健侖生物公司提供SSI血清產(chǎn)品，包括沙門氏菌，志賀氏菌，大腸桿菌，肺炎鏈球菌，嗜血桿菌等。并且提供德國有名血清品牌SiFin的核心血清產(chǎn)品，德國SiFin血清質(zhì)量好，實(shí)驗(yàn)*，已被各高校實(shí)驗(yàn)室，研究所列為推薦血清產(chǎn)品！詳情可咨詢工作人員！

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百日咳外毒素是主要的致病因子，能誘發(fā)機(jī)體的持久免疫力，并

有多種生物活性，如提高小鼠對組織胺、5～羥細(xì)菌胺和敏感性，

促進(jìn)白細(xì)胞增多，抑制巨噬細(xì)胞功能，損傷呼吸道纖毛上皮細(xì)胞

導(dǎo)致陣發(fā)性痙攣咳嗽等。細(xì)菌破裂后還能在宿主細(xì)胞漿中查到一

種熱不穩(wěn)定性毒素和其他幾種抗原成份，可引起纖毛上皮細(xì)胞炎

癥和壞死。
百日咳桿菌引起人類百日咳。病人，尤其是癥狀輕微的非典型病

人是重要的傳染源。主要經(jīng)飛沫傳播。易感兒童接觸病人后發(fā)病

率接近90%，一歲以下患兒病死率高。百日咳潛伏期1～2周。發(fā)病

早期（卡他期）僅有輕度咳嗽。細(xì)菌此時在氣管和支氣管粘膜上

大量繁殖并隨飛沫排出，傳染性zui大。1～2周后出現(xiàn)陣發(fā)性痙攣

性咳嗽（痙攣期），這時細(xì)菌釋放毒素，導(dǎo)致粘膜上皮細(xì)胞纖毛

運(yùn)動失調(diào)，大量粘稠分泌物不能排出，刺激粘膜中的感受器產(chǎn)生

強(qiáng)烈痙咳，呈現(xiàn)出特殊的高音調(diào)雞鳴樣吼聲。形成的粘液栓子還

能堵塞小支氣管導(dǎo)致肺不張和呼吸困難、紫紺。此外可伴有嘔吐

、驚厥。4～6周后逐漸轉(zhuǎn)入恢復(fù)期，陣咳減輕，趨向*，但有1

～10%病人易繼發(fā)溶血性鏈球菌、流感桿菌等的感染。本病病程較

長，故名百日咳。在致病過程中，百日咳桿菌始終在纖毛上皮細(xì)

胞表面，并不入血。
感染百日咳后可出現(xiàn)多種特異性抗體，免疫力較為持久。僅少數(shù)

病人可再次感染，再發(fā)的病情亦較輕。粘膜局部的分泌型lgA具有

阻止細(xì)菌粘附氣管粘膜細(xì)胞纖毛的作用，其抗感染作用比血清中

的抗體更重要。細(xì)胞免疫在百日咳桿菌感染中的作用還不甚明了

。
以分離培養(yǎng)為主，卡他期分離陽性率可達(dá)91.5%,而恢復(fù)期僅有約

26%。標(biāo)本采用鼻咽試子或咳皿法，在鮑～金工培養(yǎng)平板上孵育，

根據(jù)菌落形態(tài)，涂片染細(xì)菌鏡檢作出初步診斷。確診可用分離菌

與Ⅰ相免疫血清作血清玻片凝集或免疫熒光染細(xì)菌。

Pertussis exotoxin is the main virulence factor that can induce long-lasting body immunity

A variety of biological activity, such as mice to improve histamine, 5 ~ hydroxybacillary amine and sensitivity,

Promote leukocytosis, inhibit macrophage function, damage respiratory ciliated epithelial cells

Lead to paroxysmal spasms cough and so on. After bacterial rupture can be found in the host cytoplasm of a

Thermotolerant toxins and several other antigens can cause ciliary epithelial inflammation

Illness and necrosis.
Bordela pertussis causes human pertussis. Patients, especially atypical symptoms of mild symptoms

People are an important source of infection. Mainly by the droplets spread. Susceptible children after the onset of the disease

Nearly 90% rate, high mortality in children under one year old. Pertussis incubation period of 1 to 2 weeks. Disease

Early (catarrhal) only mild cough. Bacteria are now on the trachea and bronchial mucosa

Massive breeding and discharge with the droplets, the most contagious. 1 to 2 weeks after paroxysmal spasm

Sexual cough (spasm), when bacteria release toxins, resulting in mucocutaneous cilia

Movement disorders, a large number of viscous secretions can not be discharged to stimulate mucosal receptors

Strong spasmodic cough, showing a special high-pitched cock-like roar. The formation of mucus embolism also

Able to block a small bronchial aectasis and dyspnea, cyanosis. In addition may be associated with vomiting

Convulsions. 4 to 6 weeks after the gradual transfer to the recovery period, cough relieve, tend to heal, but there is 1

~ 10% of patients easily secondary to hemolytic streptococcus, influenza bacilli and other infections. The course of the disease more

Long, hence the name whooping cough. During the course of the disease, Bordela pertussis is always fine in the ciliated epithelium

The surface of the cell does not bleed.
Infection with pertussis can appear a variety of specific antibodies, the immunity is more lasting. Only a few

Patients can be infected again, the recurrence of the disease is also lighter. Mucous local secreted lgA has

The role of bacterial adhesion to tracheal mucosal cells to prevent cilia, the role of anti-infection than in serum

The antibody is more important. The role of cellular immunity in B. pertussis infection is not clear

.
In isolation and culture, the positive rate of catarrhal separation up to 91.5%, while the recovery period of only about

26%. Samples using nasopharyngeal son or cough dish method, incubation in the Bao ~ metalworking culture plate,

According to the colony morphology, smear bacteria to make a preliminary diagnosis of microscopic examination. Confirmed available isolates

And Ⅰ phase serum for serum slide agglutination or immunofluorescence staining bacteria.