- 產(chǎn)品描述
傷寒桿菌核酸檢測(cè)試劑盒
廣州健侖生物科技有限公司
產(chǎn)品規(guī)格:48T/盒;
保存條件:避光 -20度 保存。
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傷寒桿菌核酸檢測(cè)試劑盒
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【公司名稱】 廣州健侖生物科技有限公司
【市場(chǎng)部】 楊永漢
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1. HeLa細(xì)胞蛋白質(zhì)嘅制備
1)HeLa-kyoto細(xì)胞培養(yǎng)于DMEM中,并用nocodazole過(guò)夜處理嚟抑制生長(zhǎng)。
2)用刮刀收取細(xì)胞,并用PBS洗三次。一個(gè)托盤(25公分×25厘米,100毫升介質(zhì))可以惹約4毫克嘅蛋白質(zhì)。
3)將細(xì)胞懸液加到兩倍體積嘅裂解緩中,并通過(guò)細(xì)支嚟抽吸液體破壞其細(xì)胞膜。4℃,五g低溫離心三個(gè)字,有冇收集蛋白。
2.丙酮沉淀蛋白質(zhì)
1)加5倍體積嘅雪丙酮到蛋白溶液,零下30°C.哺育。
2)4℃,五g低溫離心半個(gè)鐘。
3)棄上清,將蛋白質(zhì)沉淀與80%嘅雪丙酮仔細(xì)撈勻,4℃,五g低溫離心半個(gè)鐘。
4)將蛋白沉淀晾干(逃過(guò)*糠),將沉淀溶解于消化緩沖液中(8 M尿素,0.5 M式碳?xì)滗@),較蛋白濃度為5µg/µL。(注:蛋白質(zhì)溶液pH值應(yīng)該為8.0。喺我哋嘅實(shí)驗(yàn)室中,用Bradford法測(cè)定蛋白濃度)。
3.原同烷基化蛋白質(zhì)
1)向蛋白溶液中0.05µg嘅DTT,56℃哺育半個(gè)鐘,持續(xù)振蕩。
2)向其中添加碘乙酰胺,令其終濃度為每µg蛋白中含0.25µg,鼆中室溫哺育半個(gè)鐘。
3)加DTT原液至終濃度為每µg蛋白含0.25µg,閘住反應(yīng)。
4.曳氨酸- C.消化
1)將樣品溶解于6 M尿素(含五十mM式碳?xì)滗@)緩沖液,并添加曳氨酸-C令其終濃度為每五十µg蛋白含1µg。
2)30℃哺育2鐘,將溶液稀釋至0.8 M尿素含五十mM式碳?xì)滗@。
3)每60μg蛋白中加一µg嘅胰蛋白酶,37℃哺育2個(gè)鐘。
4)向樣品中再添加等量嘅胰蛋白酶,37℃哺育過(guò)夜,加TFA進(jìn)行酸化,令樣品嘅pH值為2嚟終止消化。