寨卡病毒IgM抗體ELISA 96T/盒

樣本：(血清和血漿)

- 僅用于“體外"診斷

【健侖生物】

A.使用

酶免疫測定（ELISA），用于定量測定人血漿和血清中的寨卡病毒（ZIKA）的IgM抗體。僅用于“體外"診斷。

B.引言

寨卡病毒屬于黃病毒科和黃病毒屬，因此與登革熱，黃熱病，日本腦炎和西尼羅病毒有關(guān)。像其他黃病毒一樣，寨卡病毒是包膜和二十面體的，并且具有非分段的單鏈，正義RNA基因組。RNA基因組基因編碼非結(jié)構(gòu)蛋白和結(jié)構(gòu)蛋白，其具免疫原性的是NS1和ENV抗原。結(jié)構(gòu)蛋白封裝病毒。有兩個(gè)寨卡病毒譜系：非洲譜系和亞洲譜系。系統(tǒng)發(fā)育研究表明，在美洲的病毒傳播與亞洲菌株密切相關(guān)，在2013年爆發(fā)期間在法屬波利尼西亞傳播。

寨卡病毒通過白天活躍的蚊子作為其載體傳播。它主要由雌性埃及伊蚊傳播以產(chǎn)卵，但是已經(jīng)從伊蚊屬中的許多樹木類蚊子中分離出來，在蚊子中具有約10天的外部潛伏期。

自2015年以來，新聞報(bào)導(dǎo)提請(qǐng)注意Zika在拉丁美洲和加勒比地區(qū)的傳播。

2015年，在其胎兒有小頭癥的兩名孕婦的羊水中檢測到寨卡病毒RNA，表明病毒已經(jīng)越過胎盤，可能造成母嬰感染。

根據(jù)世衛(wèi)組織2016年2月5日，寨卡病毒和小頭癥之間的因果關(guān)系“被強(qiáng)烈懷疑但尚未科學(xué)證明"和“盡管巴西的小頭癥病例與寨卡爆發(fā)有時(shí)空相關(guān)性，更強(qiáng)有力的調(diào)查和需要進(jìn)行研究以更好地理解這種潛在的聯(lián)系。

新的建議包括向沒有Zika發(fā)燒癥狀的孕婦提供血清學(xué)測試，這些癥狀在過去2-12周內(nèi)從正在進(jìn)行的寨卡病毒傳播的地區(qū)返回;對(duì)于沒有寨卡癥狀的孕婦，他們建議在孕期第五個(gè)月開始進(jìn)行產(chǎn)前保健和隨訪測試。

C.測試原理

微板用與其它黃病毒顯示最小交叉反應(yīng)性的Zika病毒NS1合成抗原包被。

在第一次孵育中，用稀釋的樣品處理固相，并且抗原捕獲抗ZIKV IgM（如果存在的話）。在洗掉樣品的所有其它組分后，在第二孵育中，通過加入用過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的抗hIgM抗體來檢測結(jié)合的抗ZIKV IgM。在固相上捕獲的作用于底物/色原混合物上的酶產(chǎn)生與樣品中存在的抗ZIKV IgM抗體的量成比例的光學(xué)信號(hào)。

在測定中進(jìn)行IgG抗ZIKV的中和，直接在孔中進(jìn)行，以在IgM的測定中阻斷由于這類抗體的干擾。

D.組件

每個(gè)試劑盒包含足夠的試劑進(jìn)行96次測試。

微孔板：MICROPLATE

12條×8個(gè)用ZIKV特異性合成NS1抗原包被的微孔。將板密封到具有干燥劑的袋中。

2.負(fù)控制控制 -

1x2.0ml /瓶。準(zhǔn)備使用控制。其含有1％山羊血清蛋白，10mM檸檬酸鹽緩沖液pH 6.0 +/- 0.1,0.5％吐溫20,0.09％迭氮化鈉和0.1％Kathon GC作為防腐劑。陰性對(duì)照是黃色編碼的。

正控制CONTROL +

1x2.0ml /瓶。準(zhǔn)備使用控制。其含有1％山羊血清蛋白，滅活的人抗ZIKV IgM，10mM檸檬酸鹽緩沖液pH6.0 +/- 0.1,0.5％吐溫20,0.09％迭氮化鈉和0.1％Kathon GC作為防腐劑。

陽性對(duì)照是深綠色編碼。

4.洗滌緩沖液濃縮液：WASHBUF 20X

1x60ml /瓶20x濃縮溶液。一旦稀釋，洗滌溶液含有10mM磷酸鹽緩沖液pH 7.0 +/- 0.2,0.05％Tween 20和0.05％Kathon GC。

酶聯(lián)液：CONJ

1x16ml /瓶。準(zhǔn)備使用和紅色編碼。其含有針對(duì)人IgM，5％BSA，10mM Tris緩沖液pH 6.8 +/- 0.1,0.1％Kathon GC和0.02％硫酸qing大霉素的辣根過氧化物酶綴合的多克隆抗體作為防腐劑。

6.色原/基質(zhì)：SUBS TMB

1x16ml /瓶。其含有50mM檸檬酸鹽 - 磷酸鹽緩沖液pH 3.5-3.8,4％二甲基亞砜，0.03％四甲基聯(lián)苯胺（或TMB）和0.02％過氧化氫（或H 2 O 2）。

注意：要防止光存儲(chǔ)，對(duì)強(qiáng)烈的照明敏感。

7.硫酸：H 2 SO 4 0.3M

1×15ml /瓶含有0.3M H 2 SO 4溶液。

注意：刺激性（H315，H319; P280，P302 + P352，P332 + P313，P305 + P351 + P338，P337 + P313，P362 + P363）。

8.標(biāo)本稀釋液：DILSPE

2x60ml /瓶。其含有2％酪蛋白，10mM檸檬酸鹽緩沖液pH 6.0 +/- 0.1,0.2％吐溫20,0.09％迭氮化鈉和0.1％Kathon GC作為防腐劑。用于稀釋樣品。

9.中和試劑：SOLN NEUT

1x8ml /瓶。其含有山羊抗hIgG，2％酪蛋白，10mM檸檬酸鹽緩沖液pH 6.0 +/- 0.1,0.09％迭氮化鈉和0.1％Kathon GC作為防腐劑。

10.板密封箔n°2

11.包裝插入n°1

E.材料需要但不提供

1.校準(zhǔn)微量移液器（1000,100和10ul）和一次性塑料吸頭。

2. EIA水（雙蒸餾水或去離子水，經(jīng)處理以除去用作消毒劑的氧化性化學(xué)品的木炭）。

3.定時(shí)器有60分鐘或更高的范圍。

4.吸收紙巾。

5.校準(zhǔn)的ELISA微孔板恒溫培養(yǎng)箱（干或濕）設(shè)置在+ 37℃（+/- 0.5℃公差）。

6.校準(zhǔn)的ELISA微孔讀數(shù)器，具有450nm（讀數(shù)）和620-630nm（消隱）濾器。

7.校準(zhǔn)的ELISA微孔板洗滌器。

8.渦流或類似的混合工具。

F.警告和注意事項(xiàng)

1.只有在負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室的醫(yī)生的監(jiān)督下，才能由經(jīng)過專門培訓(xùn)的技術(shù)人員使用該試劑盒。

2.參與實(shí)驗(yàn)的所有人員必須佩戴防護(hù)實(shí)驗(yàn)服，不含滑石的手套和眼鏡。應(yīng)避免使用任何尖銳（針）或切割（刀片）設(shè)備。根據(jù)美國亞特蘭大疾病控制中心的建議，所有參與的人員應(yīng)接受生物安全程序的培訓(xùn)，并在國家衛(wèi)生研究所的出版物“生物安全微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室"。

3.所有參與樣品處理的人員都應(yīng)接種HBV和HAV疫苗，為疫苗提供安全和有效的疫苗。

4.在打開試劑盒和微量培養(yǎng)板以及進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)控制實(shí)驗(yàn)室環(huán)境，以避免污染物，如灰塵或空氣中的微生物制劑。保護(hù)色原/基板（或TMB）免受強(qiáng)光照射，避免進(jìn)行測試的臺(tái)面振動(dòng)。

5.收到后，將套件在2..8°C下存放在溫度控制的冰箱或冷藏室中。

6.不要在不同批次的試劑盒之間交換組件。建議同一批次的兩個(gè)套件之間的組件不應(yīng)互換。

7.檢查試劑是否清澈，不含可見的重顆?；蚓奂铩Ｈ绻麤]有，建議實(shí)驗(yàn)室主管啟動(dòng)套件更換的必要程序。

8.使用一次性吸頭避免血清/血漿樣品之間的交叉污染，并在每個(gè)樣品后更換。

9.通過使用一次性吸頭并在每次使用之間更換它們，避免試劑盒試劑之間的交叉污染。

10.不要在外部容器和內(nèi)部（小瓶）標(biāo)簽上規(guī)定的有效期后使用試劑盒。對(duì)已打開的試劑盒進(jìn)行的研究沒有指出任何相關(guān)的活性損失，多達(dá)6次使用該裝置和長達(dá)6個(gè)月。

11.將所有標(biāo)本視為潛在感染性。所有人血清標(biāo)本應(yīng)按照美國亞特蘭大疾病控制中心的建議，按照健康研究所出版物“微生物和生物實(shí)驗(yàn)室生物安全"（Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories）中所述，在生物安全2級(jí)處理。

12.在制備液體組分或?qū)⒔M分轉(zhuǎn)移到自動(dòng)化工作站時(shí)，建議使用一次性塑料制品，以避免交叉污染。

13.在使用試劑盒期間產(chǎn)生的廢物必須按照關(guān)于化學(xué)和生物物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室廢物的國家指令和法律進(jìn)行廢棄。特別地，從洗滌過程產(chǎn)生的液體廢物，來自對(duì)照/校準(zhǔn)物的殘余物和來自樣品的液體廢物必須作為潛在感染性物質(zhì)處理并在廢物之前失活。建議的滅活方法是用10％最終濃度的家用漂白劑處理16-18小時(shí)或者通過在121℃下高壓滅菌20分鐘進(jìn)行熱滅活。

14.樣品和操作的意外泄漏必須用浸有家用漂白劑，然后用水浸濕的紙巾吸附。然后應(yīng)將組織丟棄在zhi定用于實(shí)驗(yàn)室/醫(yī)院廢物的適當(dāng)容器中。

15.硫酸是刺激劑。如發(fā)生溢出，用大量水沖洗表面。

16.使用試劑盒產(chǎn)生的其他廢物（例如：用于樣品和對(duì)照品/校準(zhǔn)品的提示，用過的微量培養(yǎng)板）應(yīng)作為潛在的傳染性物質(zhì)處理，并根據(jù)國家有關(guān)實(shí)驗(yàn)室廢物的指令和法律處理。

G.樣品：準(zhǔn)備和警告

1.通過靜脈穿刺無菌抽取血液，并使用用于臨床實(shí)驗(yàn)室分析的樣品制備的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)制備血漿或血清。在用檸檬酸鹽，EDTA和肝素制備樣品中沒有觀察到影響。

2.樣品必須用代碼或名稱清楚標(biāo)識(shí)，以避免誤解結(jié)果。強(qiáng)烈建議使用條形碼卷標(biāo)和電子閱讀。

3.溶血（“紅色"）和明顯高脂血癥（“乳白色"）樣品必須丟棄，因?yàn)樗鼈兛赡墚a(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。含有纖維蛋白或重顆粒或微生物細(xì)絲和體的殘留物的樣品應(yīng)被丟棄，因?yàn)樗鼈兛赡軐?dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

血清和血漿可以在收集后在+ 2°.8°C儲(chǔ)存長達(dá)五天。對(duì)于較長的儲(chǔ)存期，樣品可以在-20℃冷凍儲(chǔ)存幾個(gè)月。任何冷凍樣品不應(yīng)多次冷凍/解凍，因?yàn)檫@可能產(chǎn)生可能影響測試結(jié)果的顆粒。

5.如果存在顆粒，則以2.000rpm離心20分鐘或使用0.2-0.8u過濾器過濾以清潔樣品用于測試。

H.組件和警告的準(zhǔn)備

微孔板：

使微孔板在打開容器之前達(dá)到室溫（約1小時(shí)）。檢查干燥劑是否未變成深綠色，表明存儲(chǔ)有缺陷。

未使用的條必須放回鋁袋中，在干燥劑的存在下，牢固地壓縮并儲(chǔ)存在+ 2°.8°C。當(dāng)?shù)谝淮未蜷_時(shí)，殘留的條帶是穩(wěn)定的，直到干燥劑袋內(nèi)的濕度指示器從黃色變?yōu)榫G色。

質(zhì)控：

準(zhǔn)備使用組件。使用前在渦流小心混合。不要稀釋！

洗滌緩沖液：

濃縮溶液的全部內(nèi)容物必須用雙重蒸餾水稀釋20倍，并在使用前輕輕地顛倒混合。在制備過程中避免起泡，因?yàn)闅馀莸拇嬖跁?huì)影響洗滌循環(huán)的效率。

注意：稀釋后，洗滌溶液在+ 2..8℃下穩(wěn)定1周

酶聯(lián)液：

可以使用。使用前在渦流上充分混合。

小心不要用氧化性化學(xué)品，空氣驅(qū)動(dòng)的灰塵或微生物污染液體。

如果該組分必須轉(zhuǎn)移，則僅使用塑料，可能是無菌的一次性容器。

色原/底物：

可以使用。使用前在渦流上充分混合。

小心不要用氧化性化學(xué)品，空氣驅(qū)動(dòng)的灰塵或微生物污染液體。

不要暴露在強(qiáng)烈的照明，氧化劑和金屬表面。

如果該部件必須轉(zhuǎn)移，只使用塑料，可能無菌的一次性容器

樣品稀釋劑

準(zhǔn)備使用組件。使用前在渦流小心混合。

中和試劑

準(zhǔn)備使用組件。使用前在渦流小心混合。

硫酸：

可以使用。使用前在渦流上充分混合。

注意：刺激性（H315，H319; P280，P302 + P352，P332 + P313，P305 + P351 + P338，P337 + P313，P362 + P363）。

I.與工具箱組合使用的儀器和工具

1.微量移液器必須進(jìn)行校準(zhǔn)，以提供測定所需的正確體積，并且必須對(duì)那些可能偶然與樣品接觸的部分進(jìn)行定期去污（家用酒精，漂白劑，醫(yī)院級(jí)消毒劑的10％溶液）。它們還應(yīng)當(dāng)定期維護(hù)，以便顯示1％的精度和+/- 2％的真實(shí)性。還應(yīng)定期對(duì)工具箱部件的溢出物或殘留物進(jìn)行去污。

2. ELISA孵化器必須設(shè)置在+ 37°C（允許+/- 0.5°C），并定期檢查以確保保持正確的溫度。干燥培養(yǎng)箱和水浴適用于孵育，條件是該儀器經(jīng)過驗(yàn)證用于ELISA測試的孵育。

3. ELISA洗滌器對(duì)測定的整體性能非常重要。在使用該套件進(jìn)行常規(guī)實(shí)驗(yàn)室測試之前，必須使用套件控制/校準(zhǔn)器和參考面板對(duì)洗衣機(jī)進(jìn)行仔細(xì)驗(yàn)證和正確優(yōu)化。通常4-5次洗滌循環(huán)（吸出+ 350ul /孔的洗滌溶液的分配= 1個(gè)循環(huán)）足以確保測定如預(yù)期那樣進(jìn)行。建議在循環(huán)之間保持20-30秒的浸泡時(shí)間。為了正確設(shè)置它們的數(shù)量，建議使用試劑盒對(duì)照/校準(zhǔn)器和良好表征的陰性和陽性參照樣品進(jìn)行測定，并檢查以匹配以下“內(nèi)部質(zhì)量控制"部分中報(bào)告的值。必須根據(jù)制造商的說明對(duì)洗衣機(jī)的交付量和維護(hù)（針的凈化和清潔）進(jìn)行定期校準(zhǔn)。

4.孵育時(shí)間具有+ 5％的公差。

5.酶聯(lián)免疫吸附測定酶標(biāo)儀必須配備450nm的讀取濾光片，并配備第二個(gè)濾光片（強(qiáng)烈建議使用620-630nm）進(jìn)行消隱。其標(biāo)準(zhǔn)性能應(yīng)為（a）帶寬<10 nm; （b）0至> 2.0的吸亮度范圍; （c）線性至> 2.0;重復(fù)性> 1％。在“測定程序"部分中鑒定的孔上進(jìn)行消隱。必須定期校準(zhǔn)讀取器的光學(xué)系統(tǒng)，以確保測量正確的光密度。應(yīng)根據(jù)制造商的說明定期維護(hù)。

6.當(dāng)使用ELISA自動(dòng)工作站時(shí)，必須仔細(xì)設(shè)置，校準(zhǔn)，控制和定期維護(hù)所有關(guān)鍵步驟（分配，孵育，洗滌，讀數(shù)，數(shù)據(jù)處理），以符合“內(nèi)部質(zhì)量控制“。測定方案必須安裝在設(shè)備的操作系統(tǒng)中，并且對(duì)于洗衣機(jī)和閱讀器進(jìn)行驗(yàn)證。此外，站的液體處理部分（分配和清洗）必須被驗(yàn)證和正確設(shè)置。必須特別注意避免用于分配和用于洗滌的針?biāo)鶐ё?。這必須研究和控制，以最小化相鄰井的污染的可能性。當(dāng)待測樣品數(shù)量超過20-30個(gè)單位時(shí)，推薦使用ELISA自動(dòng)工作站。

7. Dia.Pro的客戶服務(wù)為用戶提供設(shè)置和檢查與套件結(jié)合使用的儀器的支持，以確保符合所述要求。還支持安裝與套件一起使用的新儀器。